Sarutobi Ayame é um ninja da equipe Oniwabanshuu que ainda está em treinamento, mas atualmente trabalha como assassina. Ela também exerce meio período no Kunoichi Café.

Desde sua primeira aparição, desenvolveu uma paixão obsessiva por Sakata Gintoki, chegando a persegui‑lo de forma constante. Ayame é severamente míope, quase cega sem os óculos (não consegue distinguir objetos vivos de inanimados). Mesmo usando as lentes, há indícios de que ainda tem dificuldade visual – como quando confundiu Kagura, vestida como Gintoki, com o próprio Gintoki. Esse erro pode ser apenas fruto da sua paixão por ele.

Ela costuma colidir com Otae em diversas ocasiões. Ayame mantém uma atitude lúdica, mas se torna séria quando o assunto é seu trabalho. Além disso, parece ter interesse em temas de escravidão e S&M.

Embora Gintoki seja indiferente às suas afeições e a trate mal na maioria das vezes – por exemplo, jogando objetos nela sempre que sente sua presença perseguidora – sua personalidade masoquista faz com que ela aprecie o castigo, e a crueldade dele apenas serve para encorajá‑la.