Jill Valentine faz parte do STARS (Special Tactics and Rescue Service) e foi designada para a Equipe Alfa sob o comando do Capitão Albert Wesker. Durante o incidente na mansão, eles descobriram que a Umbrella Corporation havia criado um vírus mutagênico chamado T‑Virus, além de conduzir outros experimentos.

Jill, junto com Chris Redfield, Barry Burton, Rebecca Chambers e Brad Vance, sobreviveu ao desastre na mansão e, ao retornarem a Raccoon City, sua história foi recebida com ceticismo. Isso levou os três demais membros da STARS a iniciarem investigações próprias, enquanto Jill e Brad permaneceram na cidade para investigar uma instalação subterrânea de pesquisa da Umbrella.

Em 28 de setembro de 1998, Raccoon City foi infectada pelo T‑Virus. A Umbrella enviou o Nemesis‑T Type para caçar os membros restantes da STARS; Jill sobreviveu à provação junto com um agente da UBCS chamado Carlos Oliveira, quando o governo dos EUA decidiu erradicar a cidade usando um míssil termobárico experimental.

Após a queda da Umbrella, ela, juntamente com Chris Redfield e Barry Burton, fundou a BSAA (Bioterrorism Security Assessment Alliance). Jill se juntou a Chris em várias missões – como a busca por Veltro, o ataque à propriedade Spencer, onde supostamente morreu, e o incidente Kijuju, no qual estava sob controle de Albert Wesker e acabou lutando contra Chris e sua parceira Sheva Alomar.

Chris conseguiu libertar Jill do controle de Wesker e, ao final, ela ajudou Chris e Sheva a derrubar Wesker. Jill Valentine também aparece em várias obras não canônicas, como Marvel vs Capcom, SNK vs Capcom, We Love Golf! e Project X Zone.

Ela foi interpretada por Sienna Guillory nos filmes de ação ao vivo do Resident Evil e será retratada por Hannah John‑Kamen no próximo reboot da franquia.