Yotsuba pode ser melhor descrita como chirpy, alegre e cheia de curiosidade, pois ela quer saber todos os segredos do irmão. Essa pequena detetive nunca sai de lugar algum sem sua lupa, já que sempre checa as coisas com atenção. Sua frase de assinatura aparece sempre quando investiga algo muito interessante. Yotsuba vem da Inglaterra e é uma das três novas irmãs que fez sua primeira aparição em 2000 na revista Dengeki G's e no primeiro jogo Irmã Princesa. Na Irmã Princesa RePure, ela traz um ponto interessante sobre o quanto eles sabem do irmão. Ela se junta com Rinrin para descobrir mais sobre ele, e como o resto de suas irmãs, deseja ficar mais perto dele.