O universo de Yozakura Quartet não é apenas um, mas dois mundos distintos: o dos humanos e o dos Youkai. Embora apareça principalmente na forma humana, os Youkai podem exibir características físicas semelhantes às de animais, além de diversas habilidades especiais. Normalmente confinados ao seu próprio reino, alguns deles conseguem atravessar para o mundo da humanidade. Como símbolo de paz e ponte entre os dois reinos, foi construída uma cidade dentro da barreira protetora das sete árvores mágicas – também chamadas Sete Pilares. Essa cidade, Sakurashin, abriga humanos e Youkai, mantendo a harmonia entre eles graças ao Escritório de Aconselhamento de Vida Hizumi.
A diretora desse escritório é Akina Hiizumi, uma adolescente que herda a habilidade familiar de “afinação”, capaz de enviar Youkai prejudiciais de volta ao seu mundo permanentemente. Ela conta com o apoio de um grupo de garotas: Hime Yarizakura, prefeita dos Youkai aos 16 anos; Ao Nanami, locutora e telepata residente da cidade; e Kotoha Isone, meio-Youkai que pode invocar objetos apenas declarando seu nome.
À medida que novos moradores chegam e eventos misteriosos surgem, esse quarteto de protetores e seus aliados mais próximos devem continuar a proteger Sakurashin e preservar o frágil equilíbrio entre humanos e Youkai.
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